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麻风分枝杆菌DNA螺旋酶活性成分的表达和提纯以及受喹诺酮抑制

2007-04-29 作者:周敏摘译沈建平张国成审校 浏览:4445

Matrat S, Petrella S, Cambau E, Sougakoff W, Jarlier V, Aubra A. Expression and purification of an active form of the Mycobacterium leprae DNA gyrase and its inhibition by quinolones. Antimicrob Agents Chemother. 2007 Feb 26;

    麻风分枝杆菌是麻风病的病原体,目前体外培养还不成功,因此,评价抗麻风分枝杆菌药物的活性主要依靠鼠足垫接种方法,而且至少需要12个月才能得到结果。我们设计了一种体外试验,以研究喹诺酮类药物抗麻风分枝杆菌DNA螺旋酶的活性。在大肠埃希氏菌内我们充分表达了麻风分枝杆菌独立的GyrA和GyrB亚单位,像利用pET质体携带GyrA和GyrB基因诱导产生的His标签蛋白。用镍鳌合色谱法提纯可溶性的97.5千道尔顿GyrA亚单位和74.5千道尔顿GyrB亚单位,然后利用DNA超螺旋的活性重新构成酶。基于抑制50%(IC50)DNA超螺旋活性或诱导25%(CC25)DNA发生解螺旋的不同药物浓度,可将13种喹诺酮药物分成三组。分析喹诺酮类药物的构效关系可证明,抗麻风分枝杆菌DNA螺旋酶活性最强的喹诺酮类药物具有下列结构特点:一个碳原子取代了8位置,一个环丙基取代了N-1位置,在C-6位置上有一个氟原子,及C-7位置上有一个取代的环状结构。结论:对纯麻风分枝杆菌DNA螺旋酶的抑制和药物诱导DNA产生解螺旋的试验,是一种快速有效和安全的在体外筛选有抗麻风分枝杆菌活性潜力的喹诺酮类衍生物的方法。

 

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